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細(xì)胞養(yǎng)不好?可能是血清沒用對! 血清使用指南請收好!

更新時間:2025-01-13      點擊次數(shù):235

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,與合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配合使用,一般添加使用量在10~20%,主要作用是提供細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和生長因子等。

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  養(yǎng)過細(xì)胞的小伙伴們應(yīng)該都知道:血清,由于其復(fù)雜的內(nèi)在成分和難以控制的外界因素,它既是細(xì)胞生長的營養(yǎng),也是細(xì)胞死亡的原因

  當(dāng)我們廢寢忘食的,嘔心瀝血的,鞠躬盡瘁的養(yǎng)著細(xì)胞同時,也極有可能因為一時的疏忽和大意選擇了品質(zhì)不好的血清,導(dǎo)致珍貴的細(xì)胞意外身外,一切歸零,不得不重頭開始!
 

  血清質(zhì)量的差異性大

  市場上各種血清產(chǎn)品魚龍混珠,一不小心,你可能就使用了品質(zhì)不好的血清。

  血清按照采血時間可分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清,三者的優(yōu)劣順序為:胎牛血清>新生牛血清>小牛血清。

  一般細(xì)胞建議使用胎牛血清培養(yǎng),部分細(xì)胞可使用新生牛血清培養(yǎng),小牛血清則不建議用于細(xì)胞培養(yǎng)。

  血清在生產(chǎn)中受采血來源,條件和生產(chǎn)工藝等的影響,質(zhì)量差異較大,即使相同廠家不同批次的血清都會有差異;另外不同種類的細(xì)胞對血清的適應(yīng)也有不同,這可能與血清中所含的生長因子有關(guān),所以血清在使用之前應(yīng)提前驗證一下對所培養(yǎng)的細(xì)胞生長的促進作用。
 

  血清的正確保存及使用指南

  1)保存:胎牛血清一般在-20℃以下冷凍保存,使用之前應(yīng)先放到2~8℃冰箱過夜溶解,不建議直接放到室溫或37℃水浴溶解(升溫過快會導(dǎo)致血清中蛋白質(zhì)大量沉淀,影響血清質(zhì)量);若一次使用量不多,可溶解后分裝至小包裝凍存,避免反復(fù)凍融。血清解凍后在2~8℃保存時間一般不超過一個月。

  2)滅活:一般血清使用時不需要滅活。滅活的作用是消除血清中的各種補體成分,但事實證明血清滅活之后會產(chǎn)生大量的沉淀,會對血清的營養(yǎng)物質(zhì)造成較大破壞,對細(xì)胞的生長不利。

  3)沉淀:血清中的沉淀一般為析出的纖維蛋白,另外新生牛血清中各種蛋白含量明顯偏高,溶解時較易產(chǎn)生大量沉淀。血清中出現(xiàn)沉淀一般不會影響血清質(zhì)量,并且升溫至37℃時會溶解(不建議加熱血清);若沉淀量較多,可在400×g離心3min,取上清使用。血清和添加了血清的培養(yǎng)基在使用時不需要過濾。
 

  血清使用中的一些問題

  1)如何更換使用血清?

  需要更換使用不同品牌或批次的血清之前,需提前對要使用的血清進行驗證,可使用自己經(jīng)常培養(yǎng)的細(xì)胞進行,保證該血清對細(xì)胞生長的促進作用。在更換使用時可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代,待細(xì)胞適應(yīng)后進行更換。

  2) 血清顏色的問題

  血清顏色主要是黃色或紅色,一般淡黃色或微紅色為正常。這個主要受血紅蛋白含量的影響,若顏色太深(接近培養(yǎng)基的顏色),則有可能是采血過程中出現(xiàn)溶血導(dǎo)致的。

  3)血清沉淀的問題

  血清中的沉淀主要是纖維蛋白凝集產(chǎn)生的,一般來說每次凍融都會產(chǎn)生一部分的沉淀,但不影響血清質(zhì)量和使用。另外,血清在加入到培養(yǎng)基中后也是有可能會產(chǎn)生沉淀的,特別是滅活后的血清,會持續(xù)產(chǎn)生黑色顆粒,這可能會被錯誤判斷為污染。一般血清產(chǎn)生的沉淀在顯微鏡下觀察為微小的不規(guī)則絮狀或者顆粒物質(zhì),排查是否為污染辦法是用瓊脂板檢測。
 

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  1,低內(nèi)毒素,無細(xì)菌、支原體、噬菌體、病毒等污染;

  2,無外源添加因子,不含激素、抗生素等;

  3,已通過細(xì)胞庫中300多種細(xì)胞株和近百種原代細(xì)胞的驗證;

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  溫馨提醒:

  沒有一種血清可以滿足所有細(xì)胞生長所需,在換血清品牌,或者同一品牌換批次時都要做好驗證工作,相對來講批次間差距越小越好,不為品牌,不為價格,只買對的。

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