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胰酶消化步驟以及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2024-09-29      點(diǎn)擊次數(shù):860

胰酶消化步驟以及注意事項(xiàng)

常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、凍存保種,都離不開胰酶消化,如何將細(xì)胞完好的消化下來(lái),則依賴于對(duì)胰酶的優(yōu)先選擇以及操作手法。


01關(guān)于胰酶

胰酶全稱胰蛋白酶(Trypsin),是胰臟中提取的一種絲氨酸蛋白水解酶,主要作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)(如細(xì)胞外基質(zhì))水解,改變細(xì)胞間的連接,使貼壁細(xì)胞從瓶壁上脫落并分離單個(gè)的細(xì)胞。


消化步驟

01去掉培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。


02加入少量胰酶細(xì)胞消化液,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加或減少用量。在室溫下放置30秒至2分鐘(不同的細(xì)胞的消化時(shí)間也不同)


03肉眼觀察瓶壁由半透明(細(xì)胞單層連接成片,如磨砂玻璃)轉(zhuǎn)為透明、點(diǎn)狀(出現(xiàn)細(xì)小空隙)時(shí),或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。


04此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。


注意事項(xiàng)

1、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落(如見大量細(xì)胞片狀脫落,就是消化過(guò)頭了),直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,

沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。


2、影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性、消化時(shí)的溫度以及所加胰酶量等 。




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