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單細胞測序原理及特點

更新時間:2024-03-08      點擊次數:474

單細胞測序技術被Nature Methods(2013)評為年度技術,Science(2013)評為年度六大生物類科研熱點。單細胞測序技術又在2015年登上Science轉化醫(yī)學封面。Nature Methods 將2019年年度技術又給了單細胞多組學。2013年以來基于單細胞測序技術獲得了多方面的研究進展,文獻發(fā)表也呈現(xiàn)迅猛增長趨勢。即使來源相同的單個細胞,由于隨機生物過程和環(huán)境擾動的原因,彼此在許多

方面也存在差異,即異質性。尤其是腫瘤細胞、免疫細胞、胚胎發(fā)育期細胞、干細胞等最為突出。常規(guī)的組學技術發(fā)現(xiàn)不了這一現(xiàn)象帶來的影響,由此研究人員開啟了單細胞測序技術的探索之路。


單細胞轉錄組測序利用GemCode技術的微流控技術進行單個細胞分選,將帶有條形碼和引物的凝膠珠和單個細胞包裹在油滴中;在每個油滴內,凝膠珠溶解,細胞裂解釋放mRNA,通過逆轉錄把凝膠珠

的特異性barcode引入到cDNA并用于區(qū)分細胞;液體油層破壞后,cDNA后續(xù)進行文庫構建,結合Illumina測序平臺對文庫進行測序檢測,即可一次性獲得大量單細胞的基因表達數據,從而達到在單細胞

水平進行表達測序的目的。10x Genomics 的 Chromium Single Cell單細胞測序技術的發(fā)展,極大地促進了單細胞組學研究。


特點:


真正意義上的單細胞檢測(每一個細胞形成單獨的GEM,分別進行細胞標記)

超低的單個細胞價格

多細胞捕獲率低(小于萬分之八)

超高的捕獲效率(單個細胞捕獲效率65%)

全自動真正單細胞分離、實驗周期短

超高的細胞通量(每個樣本最多可測10000個細胞)

細胞類型多樣化(適宜40微米直徑以內,無下限)

通量高(可同時檢測8個樣本)



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