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細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳,該如何調(diào)整

更新時(shí)間:2024-03-06      點(diǎn)擊次數(shù):680

細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳,該如何調(diào)整?


細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)差的原因及解決方法,復(fù)蘇時(shí)可根據(jù)以下情況及時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

1. 細(xì)胞凍存不當(dāng)

解決方法:可以嘗試調(diào)整細(xì)胞狀態(tài),加大血清比例,后面再繼續(xù)傳代調(diào)整。


2. 自行制備的凍存細(xì)胞無(wú)活性

解決方法:制備凍存細(xì)胞時(shí)使用傳代次數(shù)少且處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞;提高凍存密度有助于提升復(fù)蘇存活率,推薦密度為100~300萬(wàn)細(xì)胞/mL。


3. 細(xì)胞復(fù)蘇方法不當(dāng)

解決方法:復(fù)蘇講究“快融",越快融化,細(xì)胞所受損傷就越小。確保冷凍細(xì)胞解凍迅速,接種前用預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)基緩慢稀釋細(xì)胞。


4. 復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng)

解決方法:確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱,并且盡快移除含有冷凍保護(hù)劑的培養(yǎng)基,防止活力下降。


5. 處理細(xì)胞時(shí)動(dòng)作不夠輕柔

解決方法:凍存和復(fù)蘇過(guò)程對(duì)大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)造成不利影響。不要通過(guò)渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細(xì)胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時(shí)除外),也不要高速離心細(xì)胞。


6. 細(xì)胞稀釋過(guò)度

解決方法:將解凍后的細(xì)胞高密度接種,以改善復(fù)蘇效果。


7. 凍存液中所用保護(hù)劑在儲(chǔ)存過(guò)程中未避光

解決方法:如果未避光儲(chǔ)存,凍存保護(hù)劑會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)細(xì)胞有毒性的物質(zhì);建議新取一只凍存保護(hù)劑,重新凍存細(xì)胞。


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