国产乱妇无码大片在线观看,国产一区二区在线视频,人妻18毛片A级毛片免费看,XXXXX性BBBBB欧美

咨詢電話

15821073967

當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  如何培養(yǎng)CMECs大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

如何培養(yǎng)CMECs大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

更新時(shí)間:2024-02-22      點(diǎn)擊次數(shù):389

如何培養(yǎng)CMECs大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

一、細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞名稱

CMECs大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

生長特性

貼壁生長

凍存條件

無血清凍存液(貨號:C7001)

培養(yǎng)體系

DMEM+10%FBS

傳代方法

第一次建議1:2傳代

傳代情況

2天換液

備注

用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng)

二、細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進(jìn)行對比培養(yǎng)

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代如果未超過80%匯合度時(shí),將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),傳代具體步驟如下:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶最后放入到37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱 存放24小時(shí)以上轉(zhuǎn)入液氮罐中。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種T25培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4、第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

四、注意事項(xiàng):有些細(xì)胞比較特殊,如貼壁不牢,在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落,這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對比培養(yǎng)),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

、售后條款:

1)細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);

2. 細(xì)胞污染問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā);

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);

5. 細(xì)胞活性問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實(shí)后予重發(fā);

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。

2細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?

1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);

7. 視具體情況而定。



如何培養(yǎng)CMECs大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

©2025 上海雅吉生物科技有限公司版權(quán)所有 All Rights Reserved.     備案號:滬ICP備18032507號-3

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)     管理登陸     sitemap.xml

欧洲精品99毛片免费高清观看| 巨胸喷奶水WWW视频网站| 国产精品女a片爽视频爽| 激情人妻另类人妻伦| 复读生与应届生高考录取有区别吗 | 国产精品美女WWW爽爽爽视频| 国产三级久久久精品麻豆三级| 竹菊精品久久久久久久99蜜桃| 曰本无码人妻丰满熟妇啪啪| 热の无码热の有码热の综合| 局长人妻互换不带套| www夜插内射视频网站| 51精产一二三产区区别| 无码熟妇人妻AV在线网站| 尤物视频网站| 两根硕大一起挤进小紧h共妻| 最新的zoom动物马| 最近日本MV字幕免费高清在线| 日韩欧美亚洲国产精品字幕久久久| 奇米777 米奇影视狠狠| 国精品人妻无码一区二区三区性色 | 国产女主播喷水视频在线观看| 亚洲 自拍 另类 欧美 综合| 精品国产乱码久久久人妻| 欧美被狂躁高潮a片视频| zo0o与人xxx欧美另类| 777米奇色狠狠888俺也去乱| 蜜臀AV无码久久久久久久| 久久久精品日本一区二区三区| cekc妇女毛多啊bn| 无码人妻久久一区二区三区69| 日本理论片| 欧洲黑人巨大视频在线观看| 欧美另类丰满熟妇乱xxxxx| 天堂√最新版中文在线| 熟妇人妻久久中文字幕| 麻豆亚洲AV永久无码精品久久| 国模无码视频一区二区三区| 奇米影视7777狠狠狠狠色| 中国熟妇色xxxxx中国学生| 精品亚洲一区二区三区四区五区|